在药品分析方法建立和验证的过程中，准确度验证是其中极为重要的一项。作为分析人员，你是否会遇到回收率实验总不合格，结果忽高忽低？这也许是杂质溶解性在作怪！以下是我在实际工作过程中对于方法建立、化合物溶解性与回收率方面的一些心得，与大家分享。
对于方法建立起初需要对化合物的性质进行预判，对化合物和其相关杂质的溶解度进行考察，以备选择正确的稀释液以及稀释液配比。
如果稀释液及其比例的选择不正确，会在分析方法建立之初及方法学验证阶段出现问题。
下面是稀释液配比不一致，造成回收率试验波动较大的典型案例：
准确度验证原方案
第一次：
第二次：
分析原因
➜两次回收率结果检测不平行，重现性结果差异大。
➜增大称样量、增大移液体积、更换实验员操作，排除了人员仪器操作等因素。
➜分析实验方案，对比可知对照品溶液和回收率溶液溶剂配比不一致。
① 空白溶剂：0.1mol/L盐酸-甲醇（1:9）
②对照品溶液溶剂配比：0.1M盐酸-甲醇（0.0005ml:0.9995）=（1:1999）
③100%回收率溶液溶剂配比：0.1M盐酸-甲醇（5.0005ml:44.9995）≈（1:9）
➜回收率偏高，原因分析：
对照品溶液中杂质峰面积偏小：杂质在0.1mol/L盐酸中易溶解，后步稀释采用甲醇稀释，可能会导致该杂质析出，从而使对照品峰面积偏小；因此会导致回收率偏大。
结论：杂质与API受溶解度影响较大，肉眼明视溶液澄清，但内在溶解性存在差异，导致回收率重现性差异较大。
验证试验
杂质储备液：精密称取杂质对照品2mg，置10ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸1ml使溶解，用甲醇稀释至刻度，摇匀。精密量取1ml，置20ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得（1000%）
对照品溶液：精密量取杂质储备液1ml，置10ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀
经验总结
➜各杂质与API溶解性在分析方法建立及验证中微妙变化会影响实验结果；
➜溶剂的选择、重现性验证在分析方法建立中尤为重要；
➜试验操作精准，排出操作误差、设备误差，更有利于结果分析判断。
温馨提示：主成分在稀释剂中的饱和溶解度，最好满足饱和溶解度大于3倍的供试品浓度！
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关于我们：
北京新领先杂质研究事业部，致力于原料药注册申报及杂质定向合成，通过杂质定向合成及杂质制备富集，获取杂质对照品，解决药物研究中杂质研究难点。通过制定有效的杂质研究和控制策略，降低质量研究工作量，缩短研发周期；创新分析方法，解决常规分析中分离与分析的难点，建立快速、稳定的分析方法。
杂质研究事业部由五个中心组成，分别为杂质对照品中心、质控中心、研发中心、工艺转化中心和技术服务中心。分别对应于杂质定制、质量研究、工艺开发、工艺转化和技术服务。部门内拥有GilsonGX-281型制备系统、Agela快速纯化系统、创新通恒LC6000制备系统、WatersSFCⅡ型馏分收集系统等。能快速富集杂质，根据MS信息，推测并获得杂质结构，解决未知杂质来源、传递及控制策略。
杂质研究事业部成员均具有多年原料药开发和杂质制备研究相关经验，尤其在抗生素领域获得很多研究成果。目前可提供满足申报要求的原料药研发和全套杂质定制服务，欢迎药界朋友垂询相关业务。
110102000668（1）号